研究背景
即使在长期抗逆转录病毒治疗后，感染记忆CD4+T细胞中HIV-1的持续存在仍然是根治的主要障碍。HIV-1 DNA储存库的建立发生在HIV-1感染后几天，它存在于不同的组织中，如淋巴结或有倾向性地优先侵袭记忆CD4+T细胞。在抗逆转录病毒治疗（ART）开始前测量的HIV-1 DNA储存库的大小是反映病毒免疫状态的重要标志物，它与疾病进展独立相关，可用于预测治疗中断后病毒反弹的时机。
外周血单个核细胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell）相关的HIV-1 DNA水平可能受多种因素的影响，包括：
①血浆病毒载量；
②外周CD4+T淋巴细胞计数；
③ART启动时间和ART治疗持续时间；
④免疫激活状态。患者接受早期治疗和长期治疗后，如果能获得病毒控制最佳状态和高CD4+T细胞计数，其HIV-1 DNA常处于较低水平。在极少数情况下（如VISCONTI研究），治疗后病毒载量已经被控制的患者其HIV-1 DNA的水平也会降低。
确定与HIV-1 DNA储存库大小相关的潜在病毒或细胞因子，将有利于监测疾病进展和抗逆转录病毒治疗。
研究方法
从既往研究的2个队列共868名HIV-1治疗患者中筛选样本。选择在第96周超低HIV-1 DNA水平（即低于20copies/106PBMCs），且严格病毒抑制（48周ART治疗后HIV-1 RNA保持低于50copies/ml或未检出）的患者作为第1组，共21例；选择严格病毒抑制但在96周检测到HIV-1 DNA的患者作为对照组（第2组）。为了分析与超低水平HIV-1 DNA水平相关的其他因素，两组匹配基线HIV-1 DNA水平。
根据1∶2的比例（第1组人数∶第2组人数），以HIV-1 DNA基线低于2.4 log copies/106PBMCs（第一组HIV-1 DNA的75%分位数）为标准，第2组共筛选出48例患者，其HIV-1 DNA的基线水平与第1组平衡。患者基线特征见表1。
表1 根据第96周HIV-1 DNA水平匹配的研究人群的基线特征
治疗前（第0周）、3个月（第12周）、6个月（第24周）、1年（第48周）和2年（第96周）收集外周血HIV-1 DNA定量检测（试剂由广州海力特生物科技有限公司生产，计算每百万PBMCs中HIV-1 DNA的数量）。从数据库中提取统计特征、CD4+T细胞计数、CD8+T细胞计数、HIV-1病毒亚型及血浆HIV-1 RNA病毒载量。
两组间连续变量和分类变量的差异分别采用标准非参数检验和卡方检验进行评估。采用单因素和多因素logistic回归来确定低于检测水平的HIV-1总DNA的预测因子。将单因素logistic回归分析中P<0.10的因素纳入多因素logistic回归模型中，所有因素均采用backward-stepwise likelihood ratio（LR）regression，P<0.20为排除标准。
研究结果
一、ART期间血浆病毒载量、CD4+T细胞计数和CD8+T细胞计数、CD4/CD8比值、HIV-1 DNA水平的时间动态变化：
69名患者在接受ART治疗48周后出现HIV-1 RNA抑制，两组患者血浆病毒载量在评估时间点无明显差异（图1a）。ART开始后第12周细胞相关HIV-1 DNA水平有显著差异（P=0.003），第24周和第96周仍存在差异（P=0.029, P<0.001，图1b）。CD4+T细胞计数在接受ART后12周内快速恢复，但两组的CD4+T细胞计数在所有观察点均明显差别（图1c）。有趣的是，第1组CD8+T细胞数量在第24周后继续减少，导致CD8+T细胞数量在第48周（P=0.043）和第96周（P=0.013，图1d）显著下降。因此，在这两次随访中，CD4/CD8比值较高（P=0.018, P=0.002，图1）。
图1 69名患者接受ART治疗后的指标变化对比
二、较高的CD4/CD8比值与ART治疗96周检测不到HIV-1 DNA有关
为了确定哪些因素与第1组ART治疗96周检测不到的HIV-1 DNA水平有关，采用二元logistic回归模型进行分析。单因素logistic回归分析显示，在第1组中，接受ART96周后较低的CD8+T细胞计数和较高的CD4/CD8比值，是HIV-1 DNA检测不到的有利因素（P=0.018, 0.014，表2）。然而，经过多因素logistic回归分析后，只有ART96周后较高的CD4/CD8比值是HIV-1 DNA检测不到的有利因素。因此，CD4/CD8比值较高的患者，接受ART治疗2年后更可能获得超低水平的HIV-1 DNA。
表2 与96周时检测不到HIV-1 DNA（<20 copies/106 PBMCs）相关的因素
研究讨论
综上所述，我们的研究首次在一小群接受ART治疗2年后的慢性HIV-1患者中，观察到了低于检测水平的HIV-1 DNA储存库。两组HIV-1 DNA基线水平匹配后，第96周CD4/CD8比值是与超低HIV-1 DNA结果相关的唯一因素，CD4+T细胞的恢复和DNA储存库没有差异。
考虑到较低的HIV-1总DNA水平和较好的免疫状态对功能性治愈而言是有意义的因素，我们的研究可能有助于监测将被选择参与根治研究（且正在进行ART治疗）的患者。
我们的研究建议：在HIV-1感染者的管理中，更应该重视CD4/CD8比值的恢复。同时，联合使用免疫调节剂可以改善CD4+T细胞的恢复，减少免疫激活，并可能有助于降低HIV-1 DNA水平。
注：本文曾于2017年发表在BMC Infect Diseases
特别感谢
感谢本文作者李太生教授和其团队，
暨南大学张嘉博士和广州市第八人民医院郑乃青博士
对本文的贡献！
本文转载来源公众号：关艾汇
